于和伟在读初中时喜欢唱歌,在校期间,学习一般的他第一年中考成绩并不理想。因为不想做待业青年,决定补习一年再考。于和伟两次中考后,成绩还是不理想,恰好当时抚顺市幼儿师范学校第一年招男生,毕业后可以去小学当音乐老师。在补习班老师的建议下,进了抚顺幼儿师范学校学音乐。毕业后,因为爱好文艺,后来考进了抚顺话剧团。1992年,于和伟考入了上海戏剧学院。
1996年,他在上海戏剧学院出演了个人首部话剧《借我一个男高音》。1997年,于和伟去了南京军区前线话剧团。1999年,参演个人首部电视剧《曹操》,从而正式进入演艺圈。
2000年,出演都市情感剧《深圳女人》。2002年,出演苏舟执导的反腐剧《省委书记》;同年,出演都市喜剧《王记大排档》,在剧中饰演王记排挡的厨师西瓜。2003年,在高希希执导的抗战剧《历史的天空》中饰演任军分区副政委万古碑;同年,出演近代传奇剧《大宅门2》,在剧中饰演白景琦孙子白占安。
2004年,于和伟与李雪健、殷桃联袂主演情感伦理剧《搭错车》,在剧中饰演阿美的亲生父亲苏民生;12月20日,其参演的抗战剧《追日》播出,在剧中饰演日本人木村一郎;同年,出演抗战剧《敌后武工队》。
2006年10月12日,与侯勇、丁志诚、殷桃等人合作主演的都市情感剧《真情年代》在中国中央电视台电视剧频道播出,于和伟在剧中饰演循规蹈矩的知识分子李和平;12月,出演严敏求、许亚军联袂主演的家庭伦理剧《孝子》播出,他在剧中饰演乔水兰的丈夫沈致公;12月13日,于和伟与许晴、殷桃、王伯昭等人共同出演的都市商战剧《局中局》播出,于和伟在剧中饰演赵天宇的孪生哥哥周英文。
2007年,出演高希希执导的伦理情感剧《男人底线》,在剧中饰演阴冷顽固的赵通达;之后,于和伟在吴君如主演的爱情喜剧《我爱芙蓉姐》中饰演广告公司总经理常青;4月6日,其参演的抗战剧《霓虹灯下的哨兵》播出,在剧中饰演前线文工团演员郝铁蛋;同年,在郑方南执导的军旅爱情剧《战地浪漫曲》中饰演心肠好的唐副司令。
2008年11月22日,主演高希希执导的年代情感剧《纸醉金迷》,他在剧中饰演的投机倒把的奸商范宝华;11月23日,与马伊琍合作主演的都市情感剧《锁春记》播出,于和伟在剧中饰演商界精英庄世博;11月25日,主演的情感剧《漂亮的事》在中央电视台电视剧频道播出,他在剧中饰演国有企业的副厂长江百川;12月4日,出演的都市悬疑剧《面具》播出,他在剧中饰演身价数千万,业内翘楚的著名精神心理学博士常思远;此外,他还出演了年代革命剧《光荣岁月》;同年,主演刑侦剧《华容道》,在剧中饰演南华的老板郭林。
2009年6月,凭借电视剧《纸醉金迷》入围第15届上海电视节白玉兰奖最佳男演员奖 。2010年5月2日,与陈建斌、陆毅、倪大红合作主演的古装剧《三国》播出,在剧中饰演三国时期蜀汉开国皇帝刘备;7月11日,与胡军、梅婷合作出演的都市情感剧《岁月》在北京卫视播出,他在剧中饰演性格善良的现代机关干部吴过;9月6日,主演的年代战争剧《家仇》在东方卫视播出,于和伟在剧中饰演个性冷静凶残多变、老谋深算的军阀张天心;9月20日,与侯勇、唐文龙联袂主演的抗战剧《特战先锋》播出,他在剧中饰演军统局二号人物毛人凤;10月20日,其参演的近代革命剧《冰是睡着的水》播出,他在剧中饰演敌对组织的特工周新宇;12月,与林永健、何赛飞共同主演的都市情感剧《老马家的幸福往事》播出,他在剧中饰演的莫文辉,为了不再过无家可归的生活,他放弃自己心爱的女人马拉,又用一生为了爱情赎罪;随后,与罗海琼搭档主演的都市情感剧《幸福在路上》,于和伟在剧中饰演相貌英俊、性格豪爽的军区参谋马刚。
2011年,凭借电视剧《幸福在路上》获得南方盛典最佳男演员奖;3月18日,主演的年代谍战剧《青盲》播出,他在剧中饰演有勇有谋、代号“青盲”的共产党王牌特工张海峰;5月16日,与谷智鑫、李沁、徐百慧等人合作主演的近代革命剧《中国1921》播出,他在剧中饰演任北京大学文科学长的陈独秀;10月19日,主演的谍战剧《兵临城下》上星播出,于和伟在剧中饰演的杨少诚,想扛枪打仗的热血青年,因祖业岌岌可危,被逼无奈扛起了振兴家业的重托。
2012年2月29日,其作为嘉宾参加的娱乐访谈节目《非常静距离》播出;5月22日,获得MSN星月年度最具价值男演员奖;6月10日,与佟瑞欣、赵恒煊、海顿等人合作主演的谍战剧《奸细》在山东电视台影视频道播出,他在剧中饰演军统关州总负责人江一平;6月25日,主演的都市情感剧《男人的战争》播出,在剧中饰演冶金大院三兄弟之首唐季山;10月1日,其参演的军旅剧《我是特种兵之利刃出鞘》播出,于和伟在剧中饰演铁拳团团长康雷;10月22日,与王丽坤合作主演的抗战剧《连环套》播出,他在剧中饰演中共地下党孟庆凡;11月7日,与刘威葳、刘钧联袂主演的家庭情感剧《大家庭》在中央电视台综合频道播出,于和伟在剧中饰演的袁刚,诚恳仗义,是70年代末拖家带口的回城知青;12月28日,参演的古装武侠剧《楚汉传奇》播出,于和伟在剧中饰演中国第一代皇帝秦始皇。
2013年2月4日,于和伟与杨童舒、李依晓、霍青等人共同主演的家庭伦理剧《天下人家》播出,他在剧中饰演入殓师唐中秋;12月15日,与王丽坤搭档主演的抗战剧《零下三十八度》在东方卫视上星播出,于和伟在剧中饰演诈死隐居的国民党特工年定邦。
2014年4月28日,与王丽坤合作主演的都市时尚情感剧《爱的多米诺》播出,他在剧中饰演玩具设计师戴谷顺;8月14日,于和伟与刘涛、邵汶联袂主演的都市情感剧《下一站婚姻》播出,他在剧中饰演转业特种兵龚箭,其后,他凭借该剧获得了第17届华鼎奖当代题材最佳男演员奖;同年,他还主演了刑侦剧《刑警队长》,于和伟在剧中饰演的刑警队长顾铭,不仅率领队友屡破大案保卫城市安全,还是一位爱妻儿孝顺父母的好男人。
2015年1月,与刘欢、叶璇联袂主演抗战剧《搜索连》,在剧中饰演师长吴休葆;4月15日,于和伟与何晟铭、白冰联袂主演的都市情感剧《婚前协议》上星播出,他在剧中饰演时装设计公司董事长高寒;5月25日,与祖峰、叶一云、张延合作主演的刑侦剧《刑警队长》,于和伟在剧中饰演的顾铭,既是智勇双全、刚柔并济的“人民卫士”,也是一位拥有着敏锐洞察力、坚忍耐力、执着信念的刑警队长;9月,与侯梦莎、黄梦莹、金美伶等人合作出演的现代青春励志剧《警花与警犬》开机,于和伟在剧中饰演的杜飞,在刑侦工作岗位上勇于担当,明察秋毫,具备良好的职业素质和过硬的侦查能力;随后,他还出演了贺岁片《过年好;12月23日,作为嘉宾出席了第30届中国电视剧飞天奖典礼;12月24日,与冯小刚、张涵予、许晴合作出演的剧情片《老炮儿》上映,于和伟在片中饰演温柔中带着霸气的龚叔。
2016年1月15日,与黄渤、孙红雷、黄磊等人合作主演的喜剧片《极限挑战》上映,他在片中饰演明朝皇帝永历帝;3月,主演古装权谋剧《大军师司马懿之军师联盟》,在剧中饰演进可金戈铁马,退可赋诗歌怀的枭雄曹操;5月15日,与朱雨辰、李小冉共同出演的年代谍战剧《追击者》播出,于和伟在剧中饰演军统特工曹若飞;7月22日,其出演的悬疑片《魔都凶音》上映,他在片中饰演史总;11月18日,与范冰冰、郭涛合作主演的剧情片《我不是潘金莲》上映,饰演新任县长郑重;同年,主演都市情感轻喜剧《下一站,别离》,在剧中饰演成熟稳重、低调务实的公司高管秋阳。
2017年,于和伟担纲艺术总监并领衔主演刑侦缉毒剧《猎毒人》,在剧中饰演滨江市飞鹏生物化学科技研究室创始人吕云鹏;7月27日,其出演的革命史诗片《建军大业》上映,于和伟在片中饰演时任中共中央总书记陈独秀;9月16日,凭借电影《我不是潘金莲》获得第31届中国电影金鸡奖最佳男配角;11月28日,其参加录制的阅读推广季播节目《见字如面第二季》在黑龙江卫视播出;12月,于和伟凭借其主演的电视剧《大军师司马懿之军师联盟》获得第8届澳门国际电视节最佳男配角提名,以及中国年度新锐榜年度艺人。
2018年,凭借电视剧《大军师司马懿之军师联盟》获得第24届上海电视节举行“白玉兰奖”最佳男配角;4月16日,为电视剧《下一站,别离》演唱的插曲《青春告别诗》正式上线;4月28日,其参演的犯罪悬疑片《幕后玩家》上映;之后,凭借电视剧《刑警队长》、《大军师司马懿之军师联盟》入围第31届中国电视剧飞天奖优秀男演员奖;6月,以飞行嘉宾身份参加了湖南卫视生活服务纪实节目《向往的生活第二季》;7月15日,其作为飞行嘉宾参加的励志体验真人秀节目《极限挑战第四季》在东方卫视播出;7月20日,其参演的现代探险剧《沙海》在腾讯视频播出,他在剧中饰演吴邪的三叔吴三省;8月10日,其参演的电影《一出好戏》上映;9月,其作为飞行导师参加的演技竞演类励志综艺节目《我就是演员》播出;10月14日,凭借电视剧《大军师司马懿之军师联盟》入围中国电视金鹰奖观众喜爱的男演员奖。
2019年3月5日,获得电视剧品质盛典活动年度实力演技剧星;4月8日,其特约主演的古装神话剧《封神演义》播出,于和伟在剧中饰演周朝开国丞相姜子牙;9月7日,获得第十七届电影表演艺术学会奖;12月31日,主演的爱情喜剧片《宠爱》上映,在片中饰演高铭。
2020年,与雷佳音、张国立、周冬雨主演了动作片《坚如磐石》,在剧中饰演富商黎志田;8月2日,主演电视剧《三体》,剧中饰演史强;10月1日,参演的电影《我和我的家乡》上映,片中饰演姜伟岸。11月26日,参演的献礼剧《大决战》开机,将在剧中饰演林彪,该剧于次年3月16日杀青;12月13日,主演的检察剧《巡回检察组》播出,在剧中饰演东川省巡回检察组组长冯森。
2021年1月9日,与章子怡、周一围搭档主演古装历史剧《上阳赋》,在剧中饰演王儇的父亲王蔺;2月1日,与张桐、侯京健主演的近代革命剧《觉醒年代》播出,在剧中饰演陈独秀;2月12日,与雷佳音、杨幂、董子健合作主演的悬疑片《刺杀小说家》上映;4月30日,主演的谍战题材电影《悬崖之上》上映,于和伟在片中饰演潜伏敌人内部多年的特工周乙;6月25日,参演的《大决战》开播;7月1日,参加的庆祝中国共产党成立100周年文艺演出《伟大征程》播出,与张桐、刘烨、白宇、邓伦、宋轶、杨洋、李现、杨紫合作表演《破晓》;8月12日,于和伟在播出的《理想之城》里饰演赵显坤。10月,成龙电影A计划第五期公布了创投项目评审团及拍摄工作坊导师团阵容,于和伟加盟创投评审团;10月15日,于和伟加盟原创喜剧竞演综艺《一年一度喜剧大赛》,担任嘉宾。11月3日,主演的《三体》电视剧发布全球首个预告片。
1991年于和伟与宋林静相恋,1996年,两人同时毕业,并被同时招进了南京军区前线话剧团。他们相识19年、结婚13年。
《流浪地球·刘慈欣经典作品集 》演播
2014年12月,参加“天使的微笑”共将爱传递慈善摄影展。2015年1月,参与爱心公益接力,呼吁大家传递文明新风 ;9月,赴四川大凉山实地探访当地缺水状况,带领探访队员们进行高海拔“无水挑战”、为缺水家庭背水,并在微博上实时分享感悟,号召大家节约用水,为山区的同胞们伸出援助之手;12月29日,参与“母亲水窖爱聚15年”公益晚会,并被授予“母亲水窖宣传大使”称号。
2016年1月21日,获得第五届中国公益节年度公益人物奖;7月,于和伟在辽宁省抚顺市捐建了两座蒲公英儿童图书馆;其后,9月6日,于和伟助阵公益直播,发起了一次以爱心捐助为主题的“吃”直播,将直播中的所有收益均悉数捐赠给大山里的留守儿童与贫困儿童,为他们能吃上“免费午饭”献出一份爱心 。
2021年12月29日,当选中国电视艺术家协会演员工作委员会副会长。
在电视剧《三国》中他充分演出了君王刘备稳重和睿智的特点。他的荧屏形象丰富而出彩,无论出演的是主角或是配角、正派还是反派、古装抑或现代,都让观众看到了他演技更多的精彩一面。在电视剧《搜索连》中,他饰演的角色打破了以往脸谱化的军人形象,既彰显了军人硬汉气质的帅气一面,性格中也不乏风流不羁,偶尔还会冒出点小幽默。这种形象在神经紧绷的抗战戏中体现了难得的喜剧效果,同时,也让人物形象更加立体真实 。(腾讯娱乐、新浪娱乐、搜狐娱乐评)
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