DC细胞

DC细胞全称树突状细胞（Dendritic Cells,DC）是近年来倍受人们关注的专职抗原呈递细胞（Antigen presentingCells,APC），能摄取、加工及呈递抗原，启动T细胞介导的免疫反应。未成熟DC具有较强的迁移能力，成熟DC能有效激活初始型T细胞，处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节。

简介

DC是形态上具有典型树突样、毛刺样突起，膜表面高表达MHC-II类分子、辅助刺激分子和黏附分子并能从非免疫组织移行至淋巴器官刺激初始T细胞活化增殖的一类异质性细胞群体。 功能最强的抗原提呈细胞。1973年，Steinman和Cohn在小鼠脾脏发现具有树枝状突起的独特形态的细胞，将之命名为树突状细胞。小鼠骨髓DC光镜下呈树枝状，细胞核清晰可见。

DC与肿瘤的发生、发展有着密切关系，大部分实体瘤内浸润的DC数量多则患者预后好。有效的抗肿瘤免疫反应的核心是产生以CD8+T细胞为主体的细胞免疫应答，这也是DC作为免疫治疗手段的基础。

美国杜克大学遗传和细胞治疗学中心的研究主任埃利-吉尔波瓦说过：“DC是激发机体免疫系统激发抵御癌症侵袭最有效的途径之一。”“DC作为高度专职化的主要抗原递呈细胞，在诱导针对相关抗原的高效、特异性T细胞免疫应答中起到关键作用。”

研究应用前景

最新研究显示DC细胞与CIK细胞共培养后,提高了细胞的增殖速度和杀伤活性,且使其对肿瘤细胞的杀伤作用更具特异性。而且DCCIK细胞对于血液、消化、呼吸、泌尿及生殖系统等多个系统肿瘤细胞均有杀伤作用。

目前，常规进行CIK细胞、DC细胞或DC-CIK细胞的培养技术都是首先用血细胞分离机体外循环病人4000-8000毫升外周血，提取出外周血里的单个核细胞，然后在GMP实验室进行细胞培养获得具有抗癌活性的CIK、DC或DC-CIK免疫细胞。

此过程中用血细胞分离机大剂量提取肿瘤病人外周血中的单个核细胞(幼稚细胞)可能会对病人的免疫系统造成损伤，临床操作时具有较大风险，很多肿瘤病人由于身体虚弱而无法完成此过程。要想克服这一困难，唯有运用极高极严格的的细胞培养技术。

让肿瘤患者获得无风险无损伤的肿瘤免疫细胞治疗成为解放军309医院国际肿瘤治疗中心所有医护人员和研发人员的责任，经过两年多几百次的实验，终于取得了重大突破，实现了DC-CIK细胞的高效率培养，培养效率比常规技术提高了百倍。现在只需要采集病人40毫升左右的外周血，就可以培养出1010个DC-CIK细胞，明显优于常规的培养方法，其效应细胞CD3+CD56+高达30%以上。

DC-CIK抗癌细胞实验表明，DC-CIK细胞的杀癌细胞的杀伤活性明显高于CIK细胞，与血细胞分离机采集PBMC方法培养的DC-CIK细胞癌细胞活性相当。

免疫效应机理

DC细胞是已知体内功能最强、惟一能活化静息T细胞的专职抗原提呈细胞，是启动、调控和维持免疫应答的中心环节。通过大量体外活化培养负载肿瘤抗原的DC细胞，当细胞数量达到一定数量后回输给病人，可诱导机体产生强烈的抗肿瘤免疫反应。

DC是肿瘤免疫治疗的重要成分。DC细胞疫苗在操作上具有很大的灵活性，包括DC细胞的来源、分离方法、抗原引入方法、延长存活时间、提高活性等各个方面都有许多不同的操作方法，每种方法都各有优势，因此可以通过不同的优化、组合衍化出多种治疗方法，从而适应于不同条件的患者。大量研究显示DC疫苗安全，易于操作，对于一系列类型的肿瘤均有免疫抑制作用，并在肿瘤的免疫治疗取得了令人鼓舞的初步结果。

免疫反应特点

1.树突状细胞（DC)是人体内功能最强的专职抗原递呈细胞，DC相当于信使，将抗原信息传递给T细胞，并具有活化T细胞的功能，很少量就可以激发强大的T细胞反应。

2.可致敏辅助T细胞的多种细胞因子，显著刺激初始型T细胞增殖，以激活体内静止状态的初始型T细胞（而巨噬细胞、B细胞仅能刺激已活化的或记忆性T细胞）。

3.帮助重建肿瘤患者对肿瘤细胞的免疫监视功能。机体的免疫系统具有完备的监视功能，但肿瘤细胞对机体的免疫系统有抵抗和抑制作用，使得免疫细胞不能识别和杀伤肿瘤细胞。在DC疫苗培养中用肿瘤抗原诱导DC使其致敏后，可将其抗原信息传递给T细胞，使T细胞重新识别和杀伤肿瘤细胞。

治疗流程

1.抽取病人外周血50-60ml——分离单个核细胞，体外诱导DC细胞——DC细胞负载肿瘤抗原，通过静脉回输给病人或经皮下注射——经肿瘤抗原负载DC能刺激自体T细胞——产生强烈的抗肿瘤免疫应答。

2.抽取病人外周血50-60ml——分离单个核细胞，体外诱导DC细胞——DC细胞负载肿瘤抗原并与自体的淋巴细胞混合，刺激自体T细胞产生细胞毒性T淋巴细胞——将这些细胞毒性T淋巴细胞，通过静脉回输给病人——直接杀伤肿瘤细胞。

该方法不仅适用实体肿瘤患者，对晚期的不可手术者或血液疾病患者也有广泛的适用性，是目前国际上先进、有效的生物治疗技术，也是肿瘤个体化治疗的原则下特异的生物治疗方案之一。

作用机制

在肿瘤免疫中，DC不能直接杀伤肿瘤细胞，但能通过识别肿瘤细胞特异性抗原，将其信号呈递给具杀伤效应的T细胞来达到监测、杀灭肿瘤的功能。

①诱导产生大量效应T细胞；

②启动效应T细胞迁移至肿瘤部位；

③保持效应T细胞在肿瘤部位的长期存在；

④抑制肿瘤血管的生成；

⑤输入人体具有终身肿瘤疫苗作用

CIK细胞

DC-CIK（或DC+CIK）是指与DC细胞共培养的CIK细胞。细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killers,CIK）是一类抗肿瘤抗病毒效应细胞，能在体外被诱导并大量增殖。树突状细胞（dendritic cell,DC）是有效的专职抗原提呈细胞，成熟的DC可以通过Ⅱ型组织相容性抗原（MHC-Ⅱ）等途径提呈肿瘤抗原，有效抵制肿瘤细胞的免疫逃逸机制。CIK细胞和DC细胞是细胞免疫治疗的2个重要组成部分，两者联合可确保高效的免疫反应。

应用

CIK细胞和同源DC细胞共培养后即可获得DC-CIK细胞。它既可促进DC细胞的成熟，更能促进ClK的增殖，并加强其抗肿瘤活性。DC细胞是机体免疫应答的始动者，能够诱导持久有力的特异性抗肿瘤免疫反应；CIK细胞可通过非特异性免疫杀伤作用清除肿瘤患者体内微小残余病灶，所以负载肿瘤抗原的DC与CIK的有机结合（即DC-CIK细胞）能产生特异性和非特异性的双重抗肿瘤效应。

一、DC治疗对肿瘤治疗的原理

①DC可以高表达MHC-Ⅰ类和MHC-Ⅱ类分子，MHC分子与其捕获加工的肿瘤抗原结合，形成肽-MHC分子复合物，并递呈给T细胞，从而启动MHC-I类限制性CTL反应和MHC-Ⅱ类限制性的CD4+Thl反应。同时，DC还通过其高表达的共刺激分子(CD80/B7-1、CD86/B7-2、CD40等)提供T细胞活化所必须的第二信号，启动了免疫应答。

②DC与T细胞结合可大量分泌IL-12、IL-18激活T细胞增殖，诱导CTL生成，主导Th1型免疫应答，利于肿瘤清除；激活穿孔素P颗粒酶B和FasL/Fas介导的途径增强NK细胞毒作用；

③DC分泌趋化因子(Chemotactic Cytokines，CCK)专一趋化初始型T细胞促进T细胞聚集，增强了T细胞的激发。保持效应T细胞在肿瘤部位长期存在，可能通过释放某些抗血管生成物质(如IL-12、IFN-γ)及前血管生成因子而影响肿瘤血管的形成。上述CCK进一步以正反馈旁分泌的方式活化DC，上调IL-12及CD80、CD86的表达；同时DC也直接向CD8+T细胞呈递抗原肽，在活化的CD4+T细胞辅助下使CD8+T细胞活化，CD4+和CD8+T细胞还可以进一步通过分泌细胞因子或直接杀伤，增强机体抗肿瘤免疫应答。

二、CIK治疗对肿瘤治疗的原理

①CIK细胞能以不同的机制识别肿瘤细胞通过直接的细胞质颗粒穿透封闭的肿瘤细胞膜进行胞吐。实现对肿瘤细胞的裂解；

②通过诱导肿瘤细胞凋亡杀伤肿瘤细胞；

③CIK细胞分泌IL-2、IL-6、IFN-γ等多种抗肿瘤的细胞因子；

④CIK细胞回输后可以激活机体免疫系统，提高机体的免疫功能。