隐孢子虫

隐孢子虫(Cryptosporidiumn Tyzzer，1907)为体积微小的球虫类寄生虫。广泛存在多种脊椎动物体内，主要为微小隐孢子虫，引起隐孢子虫病( cryptosporidiosis)，是种以腹泻为主要临床表现的人畜共患原虫病，被列为世界最常见的6种腹泻病之列，WHO于1986年将人隐孢子虫病定为艾滋病怀疑指标之一，隐孢子虫是重要的机会致病性原虫。

形态

隐孢子虫虫卵荧光抗体染色

卵囊呈圆形或椭圆形，直径4~6μm，成熟卵囊内含4个裸露的子孢子和残留体（residual body）。子孢子呈月牙形，残留体由颗粒状物和一空泡组成。在改良抗酸染色标本中，卵囊为玫瑰红色，背景为蓝绿色，对比性很强，囊内子孢子排列不规则，形态多样，残留体为暗黑（棕）色颗粒状。

分类

隐孢子虫于1907年首次在小鼠胃肠黏膜切片中发现，定名为鼠隐孢子虫(C，muris)，1912 年又报道了微小隐孢子虫，直到1955年才确定此虫为引起动物腹泻的重要病原。隐孢子虫在分类上属原生动物界顶复门(Apicomplexa)、孢子虫纲(Sporozoa)、球虫亚纲(Coccidia)、真球虫目(Euceidioride)、艾美耳球虫亚目( Eimeriorina)、隐孢科(Cryptosporididae)、隐孢子虫属(Cryptosporidiom)，已在哺乳动物、禽类、爬行类和鱼类等体内发现了15个有效种，包括安氏隐孢子虫(C.andersoni)，贝氏隐孢子虫(C.baileyi)、犬隐孢子虫(C.canis)、猫隐孢子虫(C.elis)、鸡隐孢子虫(C.galli)、人隐孢子虫(C.huminis)、火鸡隐孢子虫(C.meleagridis) 、摩氏隐孢子虫(C.molnari)、小鼠隐孢子虫(C.muris)、小球隐孢子虫(C.aroum)，魏氏隐孢子虫(C.urairi)，蜥蛇隐孢子虫(C.saurophilum)、蛇隐孢子虫(C.serpentis)、猪隐孢子虫(C.suis)、牛隐孢子虫(C.bovis)。

生活史

隐孢子虫

隐孢子虫完成整个生活史只需一个宿主。生活史简单，可分为裂殖生殖，配子生殖和孢子生殖三个阶段。虫体在宿主体内的发育时期称为内生阶段。随宿主粪便排出的成熟卵囊为感染阶段。

人和许多动物都是本虫的易感宿主，当宿主吞食成熟卵囊后，在消化液的作用下，子孢子在小肠脱囊而出，先附着于肠上皮细胞，再侵入其中，在被侵入的胞膜下与胞质之间形成带虫空泡，虫体在空泡内开始无性繁殖，先发育为滋养体，经3次核分裂发育为Ⅰ型裂殖体。成熟的Ⅰ型裂殖体含有8个裂殖子。裂殖子被释出后侵入其它上皮细胞，发育为第二代滋养体。第二代滋养体经2次核分裂发育为Ⅱ型裂殖体。成熟的Ⅱ型裂殖体含4个裂殖子。此裂殖子释出后侵入肠上皮发育为雌、雄配子体，进入有性生殖阶段，雌配子体进一步发育为雌配子，雄配子体产生16个雄配子，雌雄配子结合形成合子，进入孢子生殖阶段。合子发育为卵囊。卵囊有薄壁和厚壁两种类型，薄壁卵囊约占20%，仅有一层单位膜，其子孢子逸出后直接侵入宿主肠上皮细胞，继续无性繁殖，形成宿主自身体内重复感染；厚壁卵囊约占80%，在宿主细胞内或肠腔内孢子化（形成子孢子）。孢子化的卵囊随宿主粪便排出体外，即具感染性。完成生活史约需5~11天。隐孢子虫的生活史

致病

本虫主要寄生于小肠上皮细胞的刷状缘纳虫空泡内。空肠近端是虫体寄生数量最多的部位，严重者可扩散到整个消化道。亦可寄生在呼吸道、肺脏、扁桃体、胰腺、胆囊和胆管等器官。

寄生于肠粘膜的虫体，使粘膜表面出现凹陷，或呈火山口状。寄生数量多时，可导致广泛的肠上皮细胞的绒毛萎缩、变短、变粗、或融合、移位和脱落，上皮细胞老化和脱落速度加快。固有层多形核白细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润。此外，艾滋病患者并发隐孢子虫性胆囊炎、胆管炎时，除呈急性炎症改变外，尚可引起坏疽样坏死。

电镜图片下的隐孢子虫

隐孢子虫的致病机理尚未完全澄清，很可能与多种因素有关。小肠粘膜的广泛受损，肠粘膜表面积减少，破坏了肠道吸收功能，特别是脂肪和糖类吸收功能严重障碍，导致患者严重持久的腹泻，大量水及电解质从肠道丢失。

此外，由于隐孢子虫感染缩小了肠粘膜表面积，使得多种粘膜酶明显减少，例如乳糖酶，这也是引起腹泻的原因之一。

临床症状的严重程度与病程长短亦取决于宿主的免疫功能状况。免疫功能正常宿主的症状一般较轻，潜伏期一般为3~8天，急性起病，腹泻为主要症状，大便呈水样或糊状，一般无脓血，日排便2~20余次。严重感染的幼儿可出现喷射性水样便，量多。常伴有痉挛性腹痛、腹胀、恶心、呕吐、食欲减退或厌食、口渴和发热。病程多为自限性，持续7~14天，但症状消失后数周，粪便中仍可带有卵囊。少数病人迁延1~2个月或转为慢性反复发作。免疫缺陷宿主的症状重，常为持续性霍乱样水泻，每日腹泻数次至数十次，量多，达数升至数十升。常伴剧烈腹痛，水、电解质紊乱和酸中毒。病程可迁延数月至1年。病人常并发肠外器官隐孢子虫病，如呼吸道和胆道感染，使得病情更为严重复杂。隐孢子虫感染常为AIDS病人并发腹泻而死亡的原因。

临床表现

人的临床症状

人隐孢子虫病的病情与宿主免疫功能有关。免疫功能正常时，主要表现为急性胃肠荧症状排带黏液的水样便，有的伴有明显腹痛，此外，尚有恶心、呕吐、低热及厌食。水泻1周即可恢复。当免疫功能抑制时，则表现为慢性腹泻，水泻难以控制，病程可长达数月，并伴有呕吐、上腹痉挛、体重减轻等。儿童患者还表现为生长迟缓和发育不良，此类患者从类便持续排出大量卵囊，部分患者可表现为胆囊炎，出现上腹部疼痛、恶心、呕吐，同时伴有严重肠炎。值得注意的是，隐孢子虫是艾滋病病人合并肠道感染的常见病原体，感染后常常危及患者生命。 

动物发病表现

各种动物，尤其是新生或幼龄动物，对隐孢子虫呈高度易感性，但并非所有感染都引起急性发病。正常机体，常呈自限性或亚临床感染或无症状感染，但在免疫功能低下或受损患者，其可迅速繁殖，使病情恶化，成为死因。犊牛感染时呈暴发式流行，表现为一种轻度至重度的腹泻，严重时厌食，脱水，死亡。绵羊羔发病常在7~10日龄，甚至4~5日龄的小绵羊羔，病程7d，康复后的盖羊常复发，病情严重者则在发病后2~3d后死亡.发病率为37%~83%，死亡率为2%~40%。禽类主要是鸡、鸭，表现症状为精神沉郁、张口呼吸，伸颈、胸腹起伏明显，气喘、咳嗽、腹泻、重者饮食欲废绝，发病后2~3d内死亡。

实验诊断

病原学诊断

改良抗酸染色法下的隐孢子虫虫卵形状

粪便（水样或糊状便为好）直接涂片染色，检出卵囊即可确诊。有时呕吐物和痰也可作为受检标本。检查方法有：（1）金胺—酚染色法：新鲜或甲醛固定后的标本均可用此法，染色后在荧光显微镜下观察。卵囊圆形呈明亮乳白—黄绿色荧光。低倍镜下为圆形小亮点，周边光滑，虫体数量多时可遍布视野，犹如夜空中繁星。高倍镜下卵囊壁薄，中央淡染，似环状。本法简便、敏感，适用于批量标本的过筛检查。

（2）改良抗酸染色法：染色后背景为蓝绿色，卵囊呈玫瑰色，圆形或椭圆形，囊壁薄，内部可见1~4个梭形或月牙形子孢子，有时尚可见棕色块状的残留体。但粪便标本中多存在红色抗酸颗粒，形同卵囊，难以鉴别。

（3）金胺酚—改良抗酸染色法：先用金胺—酚染色，再用改良抗酸染色复染，用光学显微镜检查，卵囊形态同抗酸染色所示，但非特异性颗粒呈蓝黑色，颜色与卵囊不同，有利于查找卵囊，优化了改良抗酸染色法，提高了检出率。

（4）基因检测：采用PCR和DNA探针技术检测隐孢子虫特异DNA，具有特异性强、敏感性高的特点。在PCR中使用相应的引物，可扩增出隐孢子虫DNA特异的452bp片段，其敏感性可达0.1pg水平。

免疫学诊断

隐孢子虫病的免疫学诊断近年发展较快，具有弥补粪检不足的优点。

（1）粪便标本的免疫诊断：均需采用与卵囊具高亲和力的单克隆抗体。在IFAT的检测中卵囊在荧光显微镜下呈明亮黄绿色荧光，特异性高、敏感性好。适用于对轻度感染者的诊断和流行病学调查。采用ELISA技术检测粪便中的卵囊抗原，敏感性、特异性均好，勿需显微镜。流式细胞计数法可用于卵囊计数，考核疗效。

（2）血清标本的免疫诊断：常采用IFAT、ELISA和酶联免疫印迹试验（ELIB），特异性、敏感性均较高，可用于隐孢子虫病的辅助诊断和流行病学调查。

流行病学

流行环节

(1)传染源：隐孢子虫病人的粪便和呕吐物中含大量卵囊，多数患者在症状消退后仍有排出，可持续数天至5周，是主要的传染源，而健康带虫者和恢复期带虫者也是重要的传染交叉试验证实，牛、羊、猫、犬和兔等动物的隐孢子虫卵囊亦可感染人，成为畜牧地区和农村要动物源性传染源。 

(2)传播途径：隐孢子虫病的传播主要是经“粪→口”途径，通过人→动物，人→人和人境(包括水源、食物源和空气源)之间的接触而误食了隐孢子虫卵囊而受到感染。在病人的粪便中含有大量的卵囊，含有卵囊的粪便通过污染水源、食物和环境等经口进入人体而感在拥挤的家庭、幼儿园或托儿所以及医院接触传播率也很高，同性恋者口交、肛交行为（特别是在艾滋病患者)也是感染隐孢子虫的重要途径，痰中有卵囊者可通过飞沫传播。 

隐孢子虫对臭氧和加氯消毒有很强的抵抗力。一般自来水厂的加氯消毒基本无效，隐虫比其他寄生虫更易突破供水系统的过滤和消毒环节而造成隐孢子虫病的水源性暴发。英等国均有水源污染引起暴发流行的报道，如只有6万人口的美国佐治亚州的一个小镇，有1人发生了胃肠炎，其中39%的人粪检卵囊阳性，1993年威斯康星州161万人的密尔沃基市40.3万人感染，旅游者亦常通过饮用污染的水源而造成暴发流行。 

流行情况

隐孢子 虫呈全球分布，我国黑龙江陕西北京、安徽、湖南、广东、四川、新疆、上海、天津、河南等地均已报道了畜禽隐孢子虫感染。在禽类中以贝氏隐孢子虫流行最为广泛，尤其在肉用仔鸡群中流行更为严重。Goodwin等(1989)和Tzipori 等(1981)报道，鸡在自然感染的情况下，其感染率为6.4%~88.0%。 

易感宿主

隐孢子 虫的宿主范围很广，可寄生于46种脊椎动物，包括7个目的哺乳类、4个目的鸟类、2个目的鱼类，1个目爬行类的多种动物中。除感染人外，已报道的有黄牛、水牛、奶牛、马、绵羊、山羊、猪、犬.猫、鹿、猴、兔、大鼠、小鼠、豚鼠等哺乳动物均可感染。血清学检查表明，猪100%阳性，马94%.牛92% .绵羊84%、兔40%、豚鼠30%阳性。在禽类中的宿主也很广泛，已报道隐孢子虫寄生于鸡、鸭、鹅、火鸡、乌骨鸡、鹌鹑、珍珠鸡、鹧鸪、雉、孔雀、鹦鹉、金丝雀天鹅和情鸟等。 

季节性

本病的流行有一定的季节性，每年的春夏和初秋为流行的主要季节。隐孢子虫病亦被作为人类获得性免疫缺陷综合征(艾滋病)的常见病症面引起重视，本病潜伏期为36~48h至7~12d，病程2~14d能独立发病，也能与轮状病毒、冠状病毒、大肠杆菌混合感染。 

感染性和抵抗力

隐孢子虫卵囊在外界具有较强的存活力。只要卵囊的双层厚壁保持完整，在外界可存活9~12个月，且对多数消毒剂有抵抗力，但干燥1~4d可失去活力，0℃以下或65℃以上灭活30min也可将其杀死，也可使用10%福尔马林和5%氨水或工业用漂白粉，5%氨水加热65℃30 min可有效杀死卵囊。 

防治方法

为防止病人、病畜及带虫者的粪便污染食物和饮水，应注意粪便管理和个人卫生，同时保护免疫功能缺陷或低下的人，增强其免疫力，避免与病人病畜接触，凡接触病人病畜者，应及时洗手消毒。隐孢子虫病至今尚无特效治疗药。一般认为，对免疫功能正常患者，应用对症和支持疗法，纠正水、电解质紊乱可取得良好的效果，对免疫功能受损者，恢复其免疫功能、及时停用免疫抑制剂药物则是主要措施。