农业

加特纳菌

阴道分泌物中分离出一种革兰阴性杆菌

  • 中文名:加特纳菌
  • 别名:Gardner及Dukes二氏
  • 西医学名:阴道嗜血杆菌
  • 英文名称:Gardnerella vaginalis,GV
  • 所属科室妇儿科 - 产科发病部位:人类的生殖或泌尿道
  • 传染性:有传染性
  • 传播途径:性接触,间接接触
  • 加特纳菌介绍
    Gardner及Dukes二氏(1955年)首先从非特异性阴道炎的阴道分泌物中分离出一种革兰阴性杆菌,认为是非特异性阴道炎的病原菌,被命名阴道嗜血杆菌。(中文翻译也可称之为“加德纳菌”)多形性杆菌,无荚膜,无鞭毛,革兰染色阴性或染色不定(含血清的新鲜培养物可染成阳性)。阴道分泌物直接染色镜检,上皮细胞多于白细胞,并可见黏附大量革兰阴性杆菌的上皮细胞(线索细胞),而乳杆菌(革兰阳性杆菌)减少或缺如。

    发现

    其后经电镜观察及DNA-DNA杂交研究,发现它不属于现今所知细菌菌属。Greenwood(1980年)建议,由Gardner所分离出的阴道嗜血杆菌确定为一个新菌属,即Gardnerella,菌名为G·vaginalis(阴道加特纳菌,GV)。有的学者认为,应当把阴道嗜血杆菌看做一种阴道特异性疾病的病原体;也有的学者认为,由于患有阴道炎的妇女其阴道嗜血杆菌的检出率较未患阴道炎者相对偏高,而经过治疗后阴道分泌物减少,阴道嗜血杆菌也随之消失,因此认为阴道嗜血杆菌很可能同白色念珠菌一样,是妇女的一种带菌状态,由于阴道的弱酸性环境被破坏,Gardnerella vaginalis等厌氧菌过度繁殖,多于乳酸菌100~1000倍,便会产生阴道发炎的症状,引起阴道嗜血杆菌性阴道炎。因此用Ph4弱酸配方的女性护理液除了适合日常的清洁保养外,治病期间使用弱酸配方的女性护理液对引起细菌性阴道病的菌群紊乱有恢复作用。阴道嗜血杆菌性阴道炎可以通过性生活传播。与患病妇女有过性接触的男性性伴侣的尿道中约90%可以找到阴道嗜血杆菌。不过,男性带菌者一般没有症状。本病还可以通过间接接触传播,如共用毛巾、浴盆,使用公共厕所的坐便器,医源性传播等都是传播方式。

    形态

    GV的菌体通常是革兰阴性杆菌或变异的球菌样小杆菌。菌体长0.3-0.5um,宽0.1-0.2um,两端呈圆形,无荚膜及鞭毛。电镜观察显示细胞壁有一种独特薄片结构及革兰阴性菌才有的脂多糖(黄钧药1991年)。吕文和等(1994年)曾对74例培养阳性标本进行研究,GV菌体呈革兰染色阴性或染色不定小杆菌或球杆菌,着色不均匀,排列呈多态性,无鞭毛荚膜和芽孢。在普通培养基上不生长,37℃微氧环境中培养48小时,菌落为灰白色,细小半透明,无黏性S型菌落,在羊血琼脂平皿培养基上,不出现溶血现象。在人或兔血琼脂平皿上出现溶血环。生化反应。氧化酶及过氧化氢酶皆(-),葡萄糖麦芽糖糊精、淀粉皆(+);甘露糖醇,山梨醇(-)。

    分类位置

    在最早期的研究中,由生长表面及型态特征为依据,是将Gardnerella vaginalis归类为Haemophilus或Corynebacterium这两属之一。经由现代的rRNA序列及DNA比对技术,便将之独立为一个属,并为了纪念在1955年首次发现该菌的Gardner及Dukes,就将这个属称为Gardnerella,此菌亦正式更名为Gardnerella vaginalis。而属名的vaginalis意指「阴道的」。此菌即为Gardner氏阴道菌。

    栖息地

    人类的生殖或泌尿道。

    生长环境

    Gardnerella vaginalis的适合生长环境生长温度(℃---25~42最适生长温度(℃)---35~37最适生长pH值---6.0~6.5氧气需求---兼性厌氧

    培养特性

    接种后需放在蜡烛缸中或含有5%CO2的潮湿空气中。营养需求为可求性〈fastidious〉。但是并不需要nicotinamide adenine dinucleotide〈V factor〉、hemin〈X factor〉或其她类似辅?的物质。其她已知必需的营养物:biotin,叶酸〈folic acid〉,烟碱酸〈niacin〉,维她命B1〈thiamine〉,维她命B2〈riboflavin〉及两种以上的嘌呤定。在NA上呈现不生长或微量生长;在大部份一般的选择性培养基上亦不生长。若以Vaginalis agar培养,菌落成针尖状,圆形,不透明状,菌落边缘平滑。在接种后48小时内菌落可长至0.4~0.5mm,周围有透明环围绕,为β型溶血〈β hemolysis〉。

    发病机制

    关于GV引起BV的机制尚不清楚,例如BV阴道壁黏膜活检,并未发现溃疡糜烂漫及炎见异常。由此可见,GV并不是直接作用于阴道黏膜,而是由于阴道内寄生的厌氧细菌的繁殖增多与阴道分泌物中有多量GV,而抑制乳酸杆菌繁殖,并分解氨基酸生成氨和胺,使pH值增高GV获得适合pH环境。胺可以引起阴道上皮的脱落,阴道分泌物增多和特殊的鱼腥臭味。加特纳菌(gardnrella vaginallis,GV)与非特异性阴道炎(bacterial vaginosis,BV)有关。BV可以导致多种严重的妇科并发症,如子宫全切的术后感染、绒毛膜炎、羊水感染、早产、产后子宫内膜炎等。阴道加特纳菌还能引起新生儿致死性和非致死性败血症和软组织感染。因其可通过性传播,所以近年来许多学者将其列入性病病原体的范畴。与经典性病相比人们对它了解还不够深入。1980年Greenwood和Pickett经DNA杂交等研究,新建立一个菌属,即加特纳菌属,此菌属唯一的一个菌种即阴道加特纳菌。本菌无芽孢、无荚膜、无鞭毛具有多形性,革兰染色因菌龄不同而异。一般而言,实验室保存菌株趋向革兰阴性,而新鲜的临床标本分离株趋向于革兰阳性。大小约为0.5×1.5~2.5μm,兼性厌氧。

    GV与非特异性阴道炎(BV)有关,BV是阴道内正常的乳酸杆菌菌群被另一组厌氧菌为主的细菌所取代,同时伴有阴道加特纳菌、类杆菌、消化球菌及支原体等的大量增殖。该病为混合感染。尽管有上述的病原学基础,但并非阴道加特纳菌阳性就是非特异性阴道炎,因为20%~40%的正常妇女也可以检出此菌,不过量多少有所不同。因此,诊断BV,一般情况下,不作GV的细菌分离培养。BV的诊断标准为①阴道分泌物增多,稀薄均质灰白色,有恶臭味;②分泌物Ph>4.7;③分泌物胺试验阳性;④镜检有线索细胞。也就是说,单纯检出阴道加特纳菌,而不结合其他实验室及临床指征是没有诊断意义的。

    GV的所有的菌株对氨苄青霉素、羟氨苄青霉素、苯唑青霉素、青霉素、万古霉素甲硝哒唑敏感,对萘啶酸、新霉素、多粘菌素和磺胺耐药。

    检测方法

    对GV的实验诊断,主要有直接涂片找线索细胞、分离培养法、免疫荧光法及聚合酶链反应(PCR)技术等。

    革兰染色法

    无菌生理盐水中的阴道分泌物直接涂片,常规革兰染色,找到线索细胞者为阳性。与其他诊断方法相比,这种方法不论是运用在不同医务人员还是同一医务人员重复进行都具有很好的重复性,且标本可长期保存,需要时可以复查。在实验室的可操作性大,适用于研究及复查。

    吖啶橙染色荧光法

    该方法是一种新的较为理想的检测手段。取无菌生理盐水中的宫颈或阴道分泌物直接涂片,自然干燥,火焰固定,0.1 mmol/L吖啶橙染色37℃30 min,用0.01 mmol/L PBS冲洗2次,0.01 mmol/L氯化钙分色1 min,用0.01 mmol/L PBS缓冲液冲洗一次,甘油封片。荧光显微镜观察结果,在上皮细胞中发现成堆橘黄色细小杆菌者为阳性。

    分离培养鉴定法

    该法是国际公认的金标准,将无菌生理盐水中的阴道或宫颈分泌物以无菌手续接种于阴道加特纳菌专用的分离培养基上,置5%二氧化碳培养箱37℃孵育48 h,挑取灰色、半透明、光滑、露滴状菌落。如为革兰染色阴性小杆菌,进行生化鉴定。

    PCR检测法

    PCR技术具有高度的特异性和敏感性,选用特异的寡核苷酸引物序列,检测时病原体的遗传物质DNA不受抗生素等药物治疗的影响,对彻底根治病原体有着极其重要的意义。

    GV抗体的检测

    采用酶标葡萄球菌蛋白A(HRP—sPA)检测细菌性阴道病患者血清中阴道加特纳菌抗体,按ELISA常规操作,底物用邻苯二胺,用HRP—SPA液代替常规法中第二抗体,当酶标检测仪测得P/N值≥2.1判为阳性。

    免疫荧光技术

    取分泌物涂片,自然干燥,甲醛固定10 min,吹干,做免疫荧光染色(采用GV免疫标记特异性抗体试剂盒),用荧光显微镜观察,阳性可见染成发暗的阴道脱落上皮细胞上粘附着大量亮绿色荧光的细菌,长约1~2μm,两端钝圆。该方法特异性高,诊断快速,是进行临床诊断及流行病学调查的较好方法。

    nPCR(套式聚合酶链反应)方法检测

    采用PCR检测GV,其靶基因为致病株的16—23 rRNA基因序列。终产物长433 bp,该法有较高的特异性.

    流行病学

    传播方式

    GV通过性交传播,其理由是:从细菌性阴道病患者性伴的尿道可分离到该菌;使用避孕套的分离不到。国外调查发现15%的年轻性活跃女性罹患GV感染,患者配偶或性伴侣尿液GV培养阳性率高达79.92%,且生物型相伺。还有报道少数15岁以下健康女孩阴道也存在阴道加特纳菌,表明该菌还能以非性接触方式传播。

    检出率

    在BV患者与健康无症状妇女中,GV的检出率存在明显差异。据Aroutcheva等报道,BV患者中的检出率为87.5%,处于中间态妇女的检出率为34.0%,而健康妇女的检出率为26.4%。而且在BV的微生物菌群中GV处于优势地位,含量明显高于其他非正常菌群。Vontver等在总结了许多学者的研究结果后发现,有症状妇女检出率为31%~96%,无症状妇女为0~80%。虽然GV可从97%-100%的细菌性阴道病患者中检出,但也可从40%。50%的非细菌性阴道病患者或正常妇女的阴道分泌物中分离出来。

    GV是否为男性泌尿生殖道感染,特别是性传播感染(Sex transmitted infection,STI)的病原菌,报道尚不明确。孙蓉等的研究显示76例男性STI患者中有15.8%为GV阳性。且亦有在前列腺炎患者的前列腺液中检出此菌的报道。

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